Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia Baiano, Campus Serrinha

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1 Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia Baiano, Campus Serrinha CURSO: Licenciatura em Ciências Biológicas DISCIPLINA: Biologia Celular e Molecular PROFESSORA: Dra. Jaqueline Figuerêdo Rosa ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 1 MICROSCOPIA 1. INTRODUÇÃO 1.1. Dimensões e unidades de medidas no mundo microscópico O limite de resolução do olho humano é de 0.1 mm, isso significa que somente enxergamos dois pontos como pontos distintos (diferentes) caso eles estejam a, no mínimo, 0.1 mm de distância um do outro. Como conseqüência, objetos menores que 0.1 não serão vistos a olho nu. Assim, as dimensões das estruturas biológicas podem agrupar-se em dois grandes grupos: 1) macroscópicas, isto é, visíveis ao olho humano; e 2) microscópica, isto é, invisíveis ao olho humano. Para medir estruturas microscópicas, como as células e suas estruturas internas, precisamos empregar unidades de medida especiais, menores que as utilizadas no dia-a-dia. O sistema métrico emprega múltiplos e submúltiplos do metro, e os mais utilizados são: Micrometro (µm): 1 µm = 10-6 m = 10-3 mm (0,001mm) Nanômetro (nm): 1 nm = 10-9 m = 10-6 mm (0,000001mm) Angstrom (Å): 1 Å = m = 10-7 mm (0, mm) Picometro (pm): 1pm = m = 10-9 mm (0, mm) 1.2. Microscopia Para que possamos enxergar objetos em dimensões microscópicas, precisamos utilizar instrumentos que produzam imagens ampliadas desses objetos. Na Biologia, é rotineiro o uso do microscópio (do grego, micros = pequeno e scopein = observar).

2 Os microscópios usam radiações eletromagnéticas para formar as imagens ampliadas dos objetos. O microscópio estereoscópio (estereomicroscópio, microscópio estereoscópico ou lupa) e o microscópio óptico usam a luz visível (radiação eletromagnética com comprimento de onda entre 400 e 800 nm), enquanto o microscópio eletrônico usa raios catódicos (feixe de elétrons). No curso de Licenciatura em Ciências Biológicas, vocês utilizarão principalmente os microscópios estereoscópio e óptico. No microscópio estereoscópico, a iluminação é emitida por cima e/ou por baixo da amostra, ocorre a produção de uma imagem tridimensional e não é necessário preparar a amostra em uma lâmina. Enquanto, no microscópio óptico, a iluminação é emitida de baixo da amostra, a imagem produzida é normalmente bidimensional e a amostra precisa ser preparada em uma lâmina. O estereomicroscópio possui a vantagem de possibilitar a análise do material sem destruí-lo e sem cortes, é possível observá-lo por inteiro em uma imagem tridimensional aumentada, entretanto, possuí a desvantagem de ter o poder de aumento bem menor (até 1000x menor) que do microscópio óptico. Os componentes desses dois tipos de microscópios que utilizam a luz visível são similares, contudo, dada a maior complexidade do microscópio óptico, ele será estudado com mais detalhes nessa aula O Microscópio Óptico Os microscópios ópticos ou fotônicos (do grego, photos = luz) consistem, basicamente, de três partes: 1) uma parte mecânica (ou estativo), 2) um sistema óptico de iluminação, e 3) um sistema óptico de observação. Estude a descrição dos componentes do microscópio, observando a figura 1 e comparando com o microscópio à sua disposição.

3 Figura 1. Imagem de um microscópio óptico Parte mecânica - Base, Suporte ou Pé (8): é o suporte do microscópio, peça que sustenta todas as outras partes do aparelho. - Braço, Estativa ou Coluna (14): peça que liga o pé à parte superior do microscópio (ao sistema óptico de observação). É pelo braço que o microscópio pode ser erguido. - Mesa ou platina (12): peça de apoio da lâmina contendo o material para estudo, no centro da mesa existe um orifício para a passagem da luz. A lâmina de vidro é fixada na posição desejada por duas garras ou pinças (13).

4 - Charriot (6, 13): peça ligada à platina que permite movimentar a lâmina no plano horizontal da esquerda para a direita e vice-versa, e de trás para frente e vice-versa. - Parafuso macrométrico (10): localiza-se em ambos os lados do braço, serve para ajustar o foco grosseiramente através de avanço ou recuo da mesa em relação à objetiva. - Parafuso micrométrico (9): ajusta o foco finamente através de pequenos avanços ou recuos da mesa. Observação. Em alguns modelos de microscópios ópticos, os parafusos macrométricos e micrométricos vêm juntos, como na figura, entretanto, em outros eles estão em posições separadas, embora próximos. Observe como é no seu! - Canhão ou Tubo binocular/monocular (2): faz a comunicação entre as partes ópticas de ampliação e resolução, ou seja, na parte superior encontra-se a lente ocular (1) e na parte inferior, a lente objetiva (4). - Revólver ou Porta-objetiva giratória (3): peça onde se encaixam as lentes objetivas. É composto por um disco de ranhuras que permite a mudança das objetivas Sistema óptico de iluminação - Fonte luminosa (7): Os microscópios possuem uma lâmpada embutida, que pode ser de halogênio ou tungstênio, dependendo do modelo. - Condensador: conjunto de lentes situado abaixo da platina que concentra a luz e fornece iluminação uniforme à preparação biológica. - Parafuso ou Botão do condensador ou de regulagem da altura do condensador (11): permite a movimentação do condensador. - Diafragma (5): regula a intensidade de luz que atinge a preparação através de uma alavanca para sua abertura ou fechamento que limita a passagem dos raios luminosos Sistema óptico de observação. - Lentes Objetivas (4): conjunto de 4 ou mais lentes superpostas que proporcionam aumentos diferentes para observação do material. O valor do aumento

5 está gravado na objetiva. É chamada de objetiva a seco quando se usa ar entre a objetiva e o objeto a ser examinado (são as de 4x, 10x e 40x). Já na objetiva de imersão, utiliza-se um óleo transparente entre a lâmina e o objeto a ser examinado (é a de 100x). - Lentes Oculares (1): possuem 2 lentes convergentes que ampliam e corrigem os defeitos da imagem. O valor do aumento proporcionado está gravado na ocular. Observação: Obtém-se o aumento final da imagem ao microscópio, multiplicando-se o aumento da objetiva pelo da ocular. Vejamos um exemplo: com uma objetiva de 40x e uma ocular de 12,5x, teremos um aumento final de 500x (500 vezes) Passos para se manipular um microscópio óptico 1. Identifique as diferentes partes do microscópio; 2. Limpe cuidadosamente a lâmina a ser examinada; 3. Ajuste o charriot de modo a centrar o orifício da platina; 4. Coloque a lâmina sobre a platina (com a lamínula voltada para cima); 5. Ajuste o charriot de modo a centrar o material a ser observado no orifício da platina; 6. Comece as observações, utilizando-se a objetiva de menor aumento (panorâmica); 7. Olhe pela ocular ao mesmo tempo em que a platina é lentamente elevada, girando o parafuso macrométrico até que a preparação apareça focalizada. Os ajustes finais de focalização devem ser realizados com o parafuso micrométrico; 8. Desloque a lâmina sobre a platina a fim de efetuar observações em toda sua extensão, utilizando o charriot; 9. Após obter uma boa focalização, utilize as objetivas de 10x e 40x; 10. Para retirar a lâmina do microscópio, gire o revólver de modo a deixar a objetiva panorâmica na posição de Observação. Primeiramente, abaixe a platina, girando o parafuso macrométrico. Remova a lâmina com cuidado para que os dedos não toquem nas objetivas e tampouco a lâmina toque nelas.

6 1.4.1 Uso da objetiva de 100x 1. Após focalizar com a objetiva de 40x, coloque o revólver em posição intermediária, entre as objetivas de 40x e 100x. 2. Coloque uma gota de óleo de imersão sobre a estrutura a ser observada; 3. Abaixe a objetiva de 100x e focalize, mexendo sobre o micrométrico. Não focalizar com o macrométrico, pois poderá ocorrer a quebra da lâmina, o que poderá danificar o microscópio Para retirar a objetiva de imersão 1. Gire o revólver no sentido de encaixar a objetiva panorâmica; 2. Retire o óleo da objetiva de imersão com um lenço de papel e também da preparação Ao terminar de utilizar o microscópio: - Não esqueça a lâmina na platina! - Desligue a luz e retire o fio da tomada! - Caso tenha molhado a platina, enxugue-a muito bem! Cuidado ao usar substâncias químicas corrosivas e/ou corantes, para não danificar o aparelho; - Limpe a mesa, não deixando a lâmina sobre esta, guarde-a na caixa de lâminas ou entregue a professora! 1.5. Procedimento básico de preparação de lâminas 1. Adicione uma gota d água ou de um corante em uma lâmina; 2. Coloque a amostra para ser observada, tendo o cuidado de deixá-la totalmente imersa no líquido; 3. Cubra com lamínula, aproximando-a primeiramente em um ângulo de 45, depois a tombe delicadamente sobre o líquido, para evitar a formação de bolhas.

7 2. OBJETIVOS 2.1. Conhecer os componentes do microscópio 2.2. Treinar o uso do microscópio. 3. MATERIAIS 3.1. Microscópio óptico comum; 3.2. Palavras recortadas de jornal; 3.3. Lâminas e lamínulas; 3.4. Copo com água e conta-gotas; 3.5. Lâminas prontas para microscopia. 4. POCEDIMENTOS 4.1. Observação de Letras recortadas de jornal Coloque o recorte de jornal na lâmina (mantenha as letras na posição da leitura); Adicione uma gota d água e cubra com lamínula; Observe uma das letras nas objetivas de 4x, 10x e 40x. (utilize o procedimento descrito no tópico 1.4) Desenhe cada letra observada a olho nu, e nos três aumentos e compare Observação das lâminas prontas Observe uma lâmina nas quatro objetivas. Lembrar que na objetiva de 100x deve-se usar o óleo de imersão. (utilize os procedimentos descritos nos tópicos e 1.4.2) Desenhe algumas células, observando o citoplasma e o núcleo. 5. BIBLIOGRAFIA ALBERTS, B. et al. Biologia Molecular da Célula. 6. ed. Porto Alegre: Artmed, 2017; DE ROBERTIS, E. M. F.; HIB, J. Bases da Biologia Celular e Molecular. 4. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006.

8 JUNQUEIRA, L. C. U.; CARNEIRO, J. Biologia Celular e Molecular. 9. Ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, POLIZELI, M. L. T. M. Manual Prático de Biologia Celular. 2. ed. Ribeirão Preto: Editora Holos, 2008, 164p.; SADAVA, D. et al. Vida: A Ciência da Biologia. 8. ed. Artmed, v.