CAPÍTULO V. Parte Experimental

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1 CAPÍTULO V Parte Experimental

2 Capítulo V 206

3 Parte experimental 5. Parte experimental Materiais: Todos os compostos comercialmente disponíveis foram usados conforme foram recebidos. Esteróides, fluoreno, difenilmetano, isobutiraldeído, hidroperóxido de t- butilo (t-buooh) (solução 5,0-6,0 M em n-decano e solução aquosa a 70%), compostos de bismuto, montmorilonite K-10, NaClO 2 (80%), ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA), 2,6-di-terc-butil-4-metilfenol (BHT), N-hidroxiftalimida (NHPI), N- hidroxissuccinimida (NHSI) e radical 2,2,6,6-tetrametilpiperidina N-oxilo (TEMPO) foram fornecidos pela Sigma-Aldrich Co. O (+)-valenceno (70%) e o xanteno foram adquiridos à Fluka. O O 2 utilizado era proveniente de uma botija industrial, fornecida pela empresa Ar Líquido. Alguns solventes foram previamente secos e destilados antes da utilização, de acordo com os procedimentos descritos em Perrin, D. D.; Armarego, W. L. F. Purification of Laboratory Chemicals, 3 rd Ed., Pergamon Press: Oxford, New York, Beijing, Frankfurt, São Paulo, Sydney, Tokyo, Toronto Separação: Para a análise por cromatografia em camada fina (CCF) foram usadas placas comerciais Kieselgel 60 F 254, da Merck. As placas foram observadas à luz ultra-violeta (254 nm) e reveladas usando a mistura etanol-h 2 SO 4 (95:5), seguindo-se um aquecimento em placa a 120ºC. Em geral, as reacções foram seguidas por CCF, sendo o eluente indicado na proporção v/v de solventes. Para a cromatografia em coluna flash foi utilizado gel de sílica ( Mesh, Merck), sendo o eluente indicado na proporção v/v de solventes. 207

4 Capítulo V Instrumentos e equipamento: Os pontos de fusão apresentados não são corrigidos e foram determinados num aparelho Büchi B-540. Os espectros de infra-vermelho (IV) foram obtidos num espectrofotómetro JASCO FT/IR-420, e foram efectuados pelo método ATR. Os dados destes espectros indicam-se pela frequência máxima, expressa em cm -1. Os espectros de 1 H RMN foram registados a 300 MHz num espectrofotómetro Bruker AMX 300. Os espectros de 13 C RMN foram registados a 75 MHz num espectrofotómetro Bruker AMX 300. Nos espectros obtidos usou-se tetrametilsilano como padrão interno (=0 ppm) e CDCl 3 como solvente. Os dados dos espectros de 1 H-RMN estão indicados pela ordem seguinte: solvente, desvio químico em ppm, multiplicidade, constante de acoplamento J em Hz, e atribuição da molécula. Os dados de 13 C RMN estão indicados pela ordem: solvente, desvio químico e carbono respectivo. O estudo de difracção de raios X foi efectuado num difractómetro Philips X Pert, model PW. Os espectros de ultra violeta-visível foram obtidos num espectrofotómetro Bausch & Lomb Spectronic Os estudos de Ressonância Electrónica de Spin (ESR) foram realizados num espectrómetro Bruker EMX 1144 (banda X), com modelação de campo=100 khz. As condições dos estudos de ESR foram as seguintes: frequência=9,7 GHz; modelação de amplitude=2 G; potência=20 mw. 208

5 Parte experimental 5.1. Epoxidação -selectiva de 5 -esteróides pelo O 2, utilizando catalisadores de cobalto(ii) suportados em sílica funcionalizada Epoxidação do acetato de colesterilo pelo O 2, na ausência de catalisador Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de colesterilo (107,2 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml), e a esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole). A reacção decorreu durante 15 horas à temperatura ambiente, com agitação magnética e sob oxigénio à pressão de 1 atmosfera. Para tal, acoplou-se um balão vulgar, com oxigénio industrial gasoso, ao sistema reaccional. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 15 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da A mistura reaccional foi evaporada até à secura em evaporador rotativo. De seguida, dissolveu-se o produto obtido em diclorometano e esta fase orgânica foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (2x30 ml) e com água destilada (2x30 ml), seca com sulfato de sódio anidro e evaporada em evaporador rotativo, obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 101,2 mg (91%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 65: Epoxidação de 5 -esteróides pelo O 2, utilizando o catalisador 1 (1g de catalisador corresponde a 0,3 mmoles de Co(OAc) 2.4H 2 O) Epoxidação do acetato de colesterilo Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de colesterilo (107,2 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 1 (20 mg; 0,006 mmoles 209

6 Capítulo V de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 7 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 7 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi evaporado até à secura em evaporador rotativo. De seguida, dissolveu-se o produto obtido em diclorometano e esta fase orgânica foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (2x30 ml) e com água destilada (2x30 ml), seca com sulfato de sódio anidro e evaporada em evaporador rotativo, obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 100,2 mg (90%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 80:20. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6-epoxicolestan-3-ilo puro. Pf ºC (MeOH); IV: 1038, 1240, 1365, 1468, 1730, 2935 cm -1 ; 1 H RMN (CDCl 3, 300 MHz): 0,63 (s, 3H, 18-H 3 ), 1,00 (s, 3H, 19-H 3 ), 2,03 (s, 3H, CH 3 CO), 3,07 (m, 1H, 6-H), 4,76 (m, 1H, 3-H); 13 C RMN (CDCl 3, 75 MHz): 62,51 (C 5 ), 63,56 (C 6 ), 71,30 (C 3 ), 170,51 (CH 3 CO) Epoxidação do acetato de desidroepiandrosterona I. Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de desidroepiandrosterona (82,6 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 1 (15 mg; 0,0045 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 6 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 6 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 77,9 mg (90%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 80:20. O 210

7 Parte experimental produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6-epoxi- 17-oxoandrostan-3-ilo puro. Pf ºC (MeOH); IV: 1030, 1230, 1360, 1470, 1715, 1735, 2950 cm -1 ; 1 H RMN (CDCl 3, 300 MHz): 0,84 (s, 3H, 18-H 3 ), 1,03 (s, 3H, 19-H 3 ), 2,04 (s, 3H, CH 3 CO), 3,14 (m, 1H, 6-H), 4,77 (m, 1H, 3-H); 13 C RMN (CDCl 3, 75 MHz): 62,56 (C 5 ), 63,15 (C 6 ), 71,12 (C 3 ), 170,49 (CH 3 CO), 220,57 (C 17 ). II. A reacção efectuada em condições similares à anterior, mas utilizando diclorometano como solvente, decorreu durante 8 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 8 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção , obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 78,8 mg (91%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 84:16. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6-epoxi- 17-oxoandrostan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em I. III. A reacção efectuada em condições similares às duas anteriores, mas utilizando acetonitrilo como solvente, decorreu durante 20 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 20 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7, que corresponde ao produto principal da reacção, de uma segunda mancha com Rf=0,6, com absorção no UV, e de vestígios de matéria-prima inalterada. Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção , obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção (77,9 mg) foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6- epóxidos correspondentes (produto principal), com uma relação -epóxido/-epóxido de 72:28, e de aproximadamente 20% de acetato de 7,17-dioxoandrost-5-en-3-ilo (produto secundário), calculado por integração do sinal a 5,76 ppm (ver I.) 211

8 Capítulo V IV. A reacção efectuada em condições similares às três anteriores, mas utilizando acetato de etilo como solvente, decorreu durante 48 horas O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 48 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7, que corresponde ao produto principal da reacção, de uma segunda mancha com Rf=0,6, com absorção no UV, e de vestígios de matéria-prima inalterada. Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção , obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção (76,6 mg) foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6- epóxidos correspondentes (produto principal), com uma relação -epóxido/-epóxido de 77:23, e de aproximadamente 20% de acetato de 7,17-dioxoandrost-5-en-3-ilo (produto secundário), calculado por integração do sinal a 5,76 ppm (ver I.) Epoxidação do acetato de pregnenolona Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de pregnenolona (89,6 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 1 (15 mg; 0,0045 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 6 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 6 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 84,3 mg (90%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 74:26. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6-epoxi- 20-oxopregnan-3-ilo puro. Pf ºC (MeOH); IV: 1040, 1230, 1340, 1435, 1685, 1735, 2930 cm -1 ; 1 H RMN (CDCl 3, 300 MHz): 0,59 (s, 3H, 18-H 3 ), 1,01 (s, 3H, 19-H 3 ), 2,03 (s, 3H, 212

9 Parte experimental CH 3 CO), 2,10 (s, 3H, 21-H 3 ), 3,09 (m, 1H, 6-H), 4,77 (m, 1H, 3-H); 13 C RMN (CDCl 3, 75 MHz): 62,34 (C 5 ), 63,55 (C 6 ), 71,13 (C 3 ), 170,41 (CH 3 CO), 209,13 (C 20 ) Epoxidação do acetato de diosgenina Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de diosgenina (114,2 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 1 (15 mg; 0,0045 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 7 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 7 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,8 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 95,7 mg (81%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 76:24. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6epoxiespirostan-3-ilo puro. Pf ºC (MeOH); IV: 1041, 1258, 1361, 1446, 1729, 2946 cm -1 ; 1 H RMN (CDCl 3, 300 MHz): 0,74 (s, 3H, 18-H 3 ), 1,02 (s, 3H, 19-H 3 ), 2,03 (s, 3H, CH 3 CO), 3,08 (m, 1H, 6-H), 4,76 (m, 1H, 3-H); 13 C RMN (CDCl 3, 75 MHz): 62,45 (C 5 ), 63,37 (C 6 ), 66,83 (C 26 ), 71,24 (C 3 ), 80,63 (C 16 ), 109,22 (C 22 ), 170,45 (CH 3 CO) Epoxidação do acetato de estigmasterilo Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de estigmasterilo (113,7 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 1 (15 mg; 0,0045 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 5 horas. 213

10 Capítulo V O controlo da reacção por CCF [eluente: tolueno:éter dietílico 8:2] após 5 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,8 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 104,7 mg (89%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 75:25. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6epoxiestigmastan-3-ilo puro. Pf ºC (MeOH); IV: 1040, 1251, 1366, 1457, 1660, 1727, 2934, 3033 cm -1 ; 1 H RMN (CDCl 3, 300 MHz): 0,66 (s, 3H, 18-H 3 ), 0,72-0,90 (m, 9H, 26-H 3, 27-H 3 e 29-H 3 ), 1,01 (s, 3H, 19-H 3 ), 2,03 (s, 3H, CH 3 CO), 3,09 (m, 1H, 6-H), 4,76 (m, 1H, 3- H), 5,1 (m, 2H, 22-H e 23-H); 13 C RMN (CDCl 3, 75 MHz): 62,49 (C 5 ), 63,56 (C 6 ), 71,31 (C 3 ), 129,30 e 138,19 (C 23 e C 22 ), 170,55 (CH 3 CO) Epoxidação de 5 -esteróides pelo O 2, utilizando o catalisador 2 (1g de catalisador corresponde a 1 mmoles de Co(OAc) 2.4H 2 O) Epoxidação do acetato de colesterilo I. Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de colesterilo (107,2 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 2 (6 mg; 0,006 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 6 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 6 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 98,9 mg (89%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 78:22. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6-214

11 Parte experimental epoxicolestan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em II. A reacção efectuada em condições similares à anterior, mas utilizando diclorometano como solvente, decorreu durante 7 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 7 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção anterior, obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 100,1 mg (90%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 84:16. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6epoxicolestan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em III. Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de colesterilo (214,3 mg; 0,5 mmoles) em diclorometano (8 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,2 ml; 2 mmoles) e o catalisador 2 (15 mg; 0,015 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 6 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 6 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da A filtração da mistura reaccional possibilitou a recuperação de 12 mg do catalisador, o qual foi imediatamente usado na reacção seguinte ( IV.). O filtrado recolhido foi evaporado até à secura em evaporador rotativo. De seguida, dissolveu-se o produto obtido em diclorometano e esta fase orgânica foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (2x60 ml) e com água destilada (2x60 ml), seca com sulfato de sódio anidro e evaporada em evaporador rotativo, obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. 215

12 Capítulo V O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 202,2 mg (91%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 79:21. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6-epoxicolestan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em IV. A reacção efectuada em condições similares à anterior, mas utilizando o catalisador 2 (12 mg; 0,012 mmoles de Co II ) recuperado da reacção anterior ( III.), decorreu durante 7 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 7 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção anterior, obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 200,1 mg (90%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 76:24. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6epoxicolestan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em Epoxidação do acetato de desidroepiandrosterona Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de desidroepiandrosterona (82,6 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 2 (5 mg; 0,005 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 5 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 5 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi 216

13 Parte experimental analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 78,8 mg (91%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 78:22. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6-epoxi- 17-oxoandrostan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em I Epoxidação do acetato de pregnenolona Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de pregnenolona (89,6 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 2 (6 mg; 0,006 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 6 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 6 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 78,6 mg (84%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 75:25. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6-epoxi- 20-oxopregnan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em Epoxidação do acetato de diosgenina Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de diosgenina (114,2 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 2 (6 mg; 0,006 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 10 horas. 217

14 Capítulo V O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 10 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,8 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 107,5 mg (91%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 74:26. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6epoxiespirostan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em Epoxidação do colesterol Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, colesterol (96,7 mg; 0,25 mmoles) em diclorometano (4 ml). A esta solução adicionouse isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 2 (6 mg; 0,006 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 4 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 4 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,5 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 80,5 mg (80%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 76:24. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o 5,6-epoxicolestan-3ol puro. Pf ºC (MeOH); IV: 1034, 1215, 1458, 2933, 3343 cm -1 ; 1 H RMN (CDCl 3, 300 MHz): 0,65 (s, 3H, 18-H 3 ), 1,05 (s, 3H, 19-H 3 ), 3,11 (m, 1H, 6-H), 3,71 (m, 1H, 3-H); 13 C RMN (CDCl 3, 75 MHz): 63,54 (C 6 ), 62,54 (C 5 ), 71,90 (C 3 ). 218

15 Parte experimental Epoxidação do acetato de estigmasterilo Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de estigmasterilo (113,7 mg; 0,25 mmoles) em diclorometano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 2 (5 mg; 0,005 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 10 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: tolueno:éter dietílico 8:2] após 10 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,8 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 99,8 mg (85%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 82:18. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6epoxiestigmastan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em Epoxidação de 5 -esteróides pelo O 2, utilizando o catalisador 3 (1g de catalisador corresponde a 0,4 mmoles de Co(OAc) 2.4H 2 O) Epoxidação do acetato de colesterilo I. Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de colesterilo (107,2 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 3 (15 mg; 0,006 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 8 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 8 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi 219

16 Capítulo V analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 98,9 mg (89%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 78:22. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6epoxicolestan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em II. A reacção efectuada em condições similares à anterior, mas utilizando diclorometano como solvente, decorreu durante 8 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 8 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção anterior, obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 101,1 mg (91%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 80:20. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6epoxicolestan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em III. Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de colesterilo (214,3 mg; 0,5 mmoles) em diclorometano (8 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,2 ml; 2 mmoles) e o catalisador 3 (30 mg; 0,012 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 6 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 6 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da A filtração da mistura reaccional possibilitou a recuperação de 28 mg do catalisador, o qual foi imediatamente usado na reacção seguinte ( IV.). O filtrado recolhido foi evaporado até à secura em evaporador rotativo. De seguida, dissolveu-se o produto obtido em diclorometano e esta fase orgânica foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (2x60 ml) e com água destilada (2x60 ml), 220

17 Parte experimental seca com sulfato de sódio anidro e evaporada em evaporador rotativo, obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 202,3 mg (91%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 79:21. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6-epoxicolestan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em IV. A reacção efectuada em condições similares à anterior, mas utilizando o catalisador 3 (28 mg; 0,011 mmoles de Co II ) recuperado da reacção anterior ( III.), decorreu durante 6 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 6 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção anterior, obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 197,9 mg (89%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 79:21. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6epoxicolestan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em Epoxidação do acetato de desidroepiandrosterona Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de desidroepiandrosterona (82,6 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 3 (15 mg; 0,006 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 5 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 5 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto principal da 221

18 Capítulo V O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 77,1 mg (89%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 81:19. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6-epoxi- 17-oxoandrostan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em I Epoxidação do acetato de pregnenolona Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de pregnenolona (89,6 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 3 (15 mg; 0,006 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 8 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 8 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 82,4 mg (88%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 78:22. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6-epoxi- 20-oxopregnan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em Epoxidação do acetato de diosgenina Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de diosgenina (114,2 mg; 0,25 mmoles) em 1,2-dicloroetano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 3 (15 mg; 0,006 mmoles 222

19 Parte experimental de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 10 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 10 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,8 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 107,5 mg (91%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 74:26. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6epoxiespirostan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em Epoxidação do colesterol Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, colesterol (96,7 mg; 0,25 mmoles) em diclorometano (4 ml). A esta solução adicionouse isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 3 (15 mg; 0,006 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 5 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 5 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,5 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 90,6 mg (90%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 75:25. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o 5,6-epoxicolestan-3ol puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em

20 Capítulo V Epoxidação do acetato de estigmasterilo Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se, à temperatura ambiente, acetato de estigmasterilo (113,7 mg; 0,25 mmoles) em diclorometano (4 ml). A esta solução adicionou-se isobutiraldeído (0,1 ml; 1 mmole) e o catalisador 3 (15 mg; 0,006 mmoles de Co II ). A reacção decorreu sob 1 atmosfera de oxigénio, à temperatura ambiente e com agitação magnética, durante 8 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: tolueno:éter dietílico 8:2] após 8 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,8 que corresponde ao produto principal da O isolamento foi realizado de forma similar ao descrito em , obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção dos 5,6-epóxidos correspondentes, 105,9 mg (90%), com uma relação -epóxido/-epóxido de 82:18. O produto bruto obtido foi cristalizado de metanol, obtendo-se o acetato de 5,6epoxiestigmastan-3-ilo puro, que foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em

21 Parte experimental 5.2. Oxidação alílica utilizando hidroperóxido de t-butilo, catalisada por compostos de bismuto(iii) Oxidação do acetato de desidroepiandrosterona com hidroperóxido de t- butilo, na ausência de catalisador Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se acetato de desidroepiandrosterona (165,2 mg; 0,5 mmoles) em acetonitrilo (3 ml). À solução previamente estabilizada à temperatura de 70ºC, adicionou-se t-buooh (Solução 5,0-6,0 M em n-decano) (0,9 ml; aprox. 5 mmoles). A reacção decorreu à temperatura de 70ºC durante 24 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 24 horas revelou fraca reactividade Oxidação alílica do acetato de desidroepiandrosterona com hidroperóxido de t-butilo, catalisada por compostos de bismuto(iii) Oxidação com hidroperóxido de t-butilo (solução 5,0-6,0 M em n-decano) I. Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se acetato de desidroepiandrosterona (165,2 mg; 0,5 mmoles) em acetonitrilo (3 ml). À solução previamente estabilizada à temperatura de 70ºC, adicionou-se BiCl 3 (16 mg; 0,05 mmoles) e t-buooh (solução 5,0-6,0 M em n-decano) (0,9 ml; aprox. 5 mmoles). A reacção decorreu à temperatura de 70ºC durante 20 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 20 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto da A mistura da reacção foi filtrada sobre vácuo. O filtrado foi vertido sobre solução saturada de sulfito de sódio (200 ml) e extraída com éter etílico (3x50 ml). A fase orgânica foi, sucessivamente, lavada com HCl 10% (25 ml), solução saturada de bicarbonato de sódio (25 ml) e com água destilada (25 ml), seca com sulfato de sódio 225

22 Capítulo V anidro e evaporada em evaporador rotativo obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção de acetato de 7,17-dioxoandrost-5-en-3-ilo, 151,4 mg (88%). P. f ºC (MeOH); IV: 1244, 1627, 1671, 1721, 1738, 2922, 3020 cm -1 ; 1 H RMN (CDCl 3, 300 MHz): 0,89 (s, 3H, 18-H 3 ), 1,24 (s, 3H, 19-H 3 ), 2,06 (s, 3H, CH 3 CO), 4,72 (m, 1H, 3-H), 5,76 (m, 1H, 6-H); 13 C RMN (CDCl 3, 75 MHz): 71,90 (C 3 ), 126,43 (C 6 ), 164,79 (C 5 ), 170,19 (CH 3 CO), 200,66 (C 7 ), 220,14 (C 17 ). II. A reacção efectuada em condições semelhantes às da reacção anterior, mas utilizando Bi(NO 3 ) 3.5H 2 O (24 mg; 0,05 mmoles) como catalisador, decorreu durante 36 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 36 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção anterior, obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção de acetato de 7,17- dioxoandrost-5-en-3-ilo, 145,1 mg (84%), que após cristalização em metanol foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em I.. III. A reacção efectuada em condições semelhantes às da reacção I., mas utilizando Bi 2 O 3 (23 mg; 0,05 mmoles) como catalisador, decorreu durante 78 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 78 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção I., obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção de acetato de 7,17- dioxoandrost-5-en-3-ilo, 135,9 mg (79%), que após cristalização em metanol foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em I.. 226

23 Parte experimental IV. A reacção efectuada em condições semelhantes às da reacção I., mas utilizando Bi(CH 3 COO) 3 (19 mg; 0,05 mmoles) como catalisador, decorreu durante 102 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 102 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção I., obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção de acetato de 7,17- dioxoandrost-5-en-3-ilo, 149,6 mg (87%), que após cristalização em metanol foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em I.. V. A reacção efectuada em condições semelhantes às da reacção I., mas utilizando BiOCl (13 mg; 0,05 mmoles) como catalisador, decorreu durante 102 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 102 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção I., obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção de acetato de 7,17- dioxoandrost-5-en-3-ilo, 147,8 mg (86%), que após cristalização em metanol foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em I.. VI. A reacção efectuada em condições semelhantes às da reacção I., mas utilizando oxinitrato de bismuto (44 mg; 0,03 mmoles) como catalisador, decorreu durante 113 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 113 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção I., obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção 227

24 Capítulo V foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção de acetato de 7,17- dioxoandrost-5-en-3-ilo, 137,1 mg (80%), que após cristalização em metanol foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em I Oxidação com hidroperóxido de t-butilo (solução aquosa a 70%) I. A reacção efectuada em condições semelhantes às da reacção I., mas utilizando t-buooh (solução aquosa a 70%) (0,7 ml; aprox. 5 mmoles) como oxidante, decorreu durante 38 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 38 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção I., obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção de acetato de 7,17- dioxoandrost-5-en-3-ilo, 117,2 mg (68%), que após cristalização em metanol foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em I.. II. A reacção efectuada em condições semelhantes às da reacção anterior, mas utilizando Bi(CH 3 COO) 3 (19 mg; 0,05 mmoles) como catalisador, decorreu durante 120 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 120 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção I., obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção de acetato de 7,17- dioxoandrost-5-en-3-ilo, 115,8 mg (67%), que após cristalização em metanol foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em I.. 228

25 Parte experimental Oxidação alílica utilizando hidroperóxido de t-butilo, catalisada por BiCl Oxidação do acetato de colesterilo Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se acetato de colesterilo (214,3 mg; 0,5 mmoles) em acetonitrilo (3 ml). À solução previamente estabilizada à temperatura de 70ºC, adicionou-se BiCl 3 (16 mg; 0,05 mmoles) e t-buooh (solução 5,0-6,0 M em n-decano) (0,9 ml; aprox. 5 mmoles). A reacção decorreu à temperatura de 70ºC durante 22 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 22 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,8 que corresponde ao produto da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção I., obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção de acetato de 7- oxocolest-5-en-3-ilo, 181,7 mg (82%). P. f ºC (MeOH); IV: 1244, 1628, 1670, 1727, 2950, 3025 cm -1 ; 1 H RMN (CDCl 3, 300 MHz): 0,68 (s, 3H, 18-H 3 ), 1,20 (s, 3H, 19-H 3 ), 2,03 (s, 3H, CH 3 CO), 4,69 (m, 1H, 3-H), 5,70 (m, 1H, 6-H); 13 C RMN (CDCl 3, 75 MHz): 72,17 (C 3 ), 126,64 (C 6 ), 163,82 (C 5 ), 170,22 (CH 3 CO), 201,87 (C 7 ) Oxidação do acetato de pregnenolona Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se acetato de pregnenolona (179,3 mg; 0,5 mmoles) em acetonitrilo (3 ml). À solução previamente estabilizada à temperatura de 70ºC, adicionou-se BiCl 3 (16 mg; 0,05 mmoles) e t-buooh (solução 5,0-6,0 M em n-decano) (0,9 ml; aprox. 5 mmoles). A reacção decorreu à temperatura de 70ºC durante 22 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:1] após 22 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,7 que corresponde ao produto da Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção I., obteve-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção 229

26 Capítulo V foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção de acetato de 7,20- dioxopregn-5-en-3-ilo, 145,2 mg (78%). P. f ºC (MeOH); IV: 1244, 1630, 1669, 1704, 1727, 2941, 3037 cm -1 ; 1 H RMN (CDCl 3, 300 MHz): 0,66 (s, 3H, 18-H 3 ), 1,21 (s, 3H, 19-H 3 ), 2,06 (s, 3H, CH 3 CO), 2,14 (s, 3H, 21-H 3 ), 4,72 (m, 1H, 3-H), 5,73 (m, 1H, 6-H); 13 C RMN (CDCl 3, 75 MHz): 72,00 (C 3 ), 126,41 (C 6 ), 164,13 (C 5 ), 170,23 (CH 3 CO), 201,11 (C 7 ), 209,64 (C 20 ) Oxidação do acetato de diosgenina I. Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se acetato de diosgenina (228,3 mg; 0,5 mmoles) em acetonitrilo (3 ml). À solução previamente estabilizada à temperatura de 70ºC, adicionou-se BiCl 3 (16 mg; 0,05 mmoles) e t-buooh (solução 5,0-6,0 M em n-decano) (0,9 ml; aprox. 5 mmoles). A reacção decorreu à temperatura de 70ºC durante 24 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 24 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto da reacção e de produtos secundários não caracterizados. Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção I., obteve-se um produto que foi seco na estufa de vácuo. Após secagem, o produto da reacção foi sujeito a cromatografia flash (eluente: acetato de etilo-éter de petróleo 40-60ºC 1:4), obtendo-se o acetato de 7-oxoespirost-5-en-3-ilo, 141,2 mg (60%). P. f ºC (MeOH); IV: 1242, 1629, 1668, 1731, 2947, 3029 cm -1 ; 1 H RMN (CDCl 3, 300 MHz): 0,79 (s, 3H, 18-H 3 ), 1,23 (s, 3H, 19-H 3 ), 2,05 (s, 3H, CH 3 CO), 4,69 (m, 1H, 3-H), 5,71 (m, 1H, 6-H); 13 C RMN (CDCl 3, 75 MHz): 67,15 (C 26 ), 72,14 (C 3 ), 80,94 (C 16 ), 109,22 (C 22 ), 126,51 (C 6 ), 164,09 (C 5 ), 170,32 (CH 3 CO), 201,43 (C 7 ). II. A reacção efectuada em condições semelhantes às da reacção anterior, mas à temperatura de 60ºC, decorreu durante 44 horas. 230

27 Parte experimental O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 44 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto da reacção e de produtos secundários não caracterizados. Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção I., obteve-se um produto que foi seco na estufa de vácuo. Após secagem, o produto da reacção foi sujeito a cromatografia flash (eluente: acetato de etilo-éter de petróleo 40-60ºC 1:4), obtendo-se o acetato de 7-oxoespirost-5-en-3-ilo, 145,9 mg (62%), que após cristalização em metanol foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em I.. III. A reacção efectuada em condições semelhantes às da reacção I., mas utilizando ciclo-hexano como solvente, decorreu durante 24 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 2:1] após 24 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,6 que corresponde ao produto da reacção e de produtos secundários não caracterizados. Após o isolamento, realizado de forma similar ao da reacção I., obteve-se um produto que foi seco na estufa de vácuo. Após secagem, o produto da reacção foi sujeito a cromatografia flash (eluente: acetato de etilo-éter de petróleo 40-60ºC 1:4), obtendo-se o acetato de 7-oxoespirost-5-en-3-ilo, 143,5 mg (61%), que após cristalização em metanol foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em I Oxidação da desidroepiandrosterona I. Num balão de fundo redondo de 25 ml dissolveu-se desidroepiandrosterona (144,2 mg; 0,5 mmoles) em acetonitrilo (3 ml). À solução previamente estabilizada à temperatura de 70ºC, adicionou-se BiCl 3 (16 mg; 0,05 mmoles) e t-buooh (solução 5,0-6,0 M em n-decano) (0,9 ml; aprox. 5 mmoles). A reacção decorreu à temperatura de 70ºC durante 18 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:2] após 18 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,4 que corresponde ao produto da 231

28 Capítulo V A mistura da reacção foi filtrada sobre vácuo. O filtrado foi vertido sobre solução saturada de sulfito de sódio (100 ml) e extraída com éter etílico (3x50 ml). A fase orgânica foi, sucessivamente, lavada com HCl 10% (25 ml), solução saturada de bicarbonato de sódio (25 ml) e com água destilada (25 ml), seca com sulfato de sódio anidro e evaporada em evaporador rotativo obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção de 3-hidroxiandrost-5-eno-7,17-diona, 120,9 mg (80%). P. f ºC (MeOH); IV: 1298, 1630, 1649, 1719, 2941, 3025, 3480 cm -1 ; 1 H RMN (CDCl 3, 300 MHz): 0,90 (s, 3H, 18-H 3 ), 1,23 (s, 3H, 19-H 3 ), 3,68 (m, 1H, 3- H), 5,75 (m, 1H, 6-H); 13 C RMN (CDCl 3, 75 MHz): 70,21 (C 3 ), 125,73 (C 6 ), 166,20 (C 5 ), 200,74 (C 7 ), 219,81 (C 17 ). II. Num balão de fundo redondo de 50 ml dissolveu-se desidroepiandrosterona (865,4 mg; 3 mmoles) em acetonitrilo (18 ml). À solução previamente estabilizada à temperatura de 70ºC, adicionou-se BiCl 3 (96 mg; 0,3 mmoles) e t-buooh (solução 5,0-6,0 M em n-decano) (5,4 ml; aprox. 30 mmoles). A reacção decorreu à temperatura de 70ºC durante 28 horas. O controlo da reacção por CCF [eluente: n-hexano:acetato de etilo 1:2] após 28 horas revelou a presença de uma mancha de Rf=0,4 que corresponde ao produto da A mistura da reacção foi filtrada sobre vácuo. O filtrado foi vertido sobre solução saturada de sulfito de sódio (450 ml) e extraída com éter etílico (5x100 ml). A fase orgânica foi, sucessivamente, lavada com HCl 10% (45 ml), solução saturada de bicarbonato de sódio (45 ml) e com água destilada (45 ml), seca com sulfato de sódio anidro e evaporada em evaporador rotativo obtendo-se um produto sólido, branco, que foi seco na estufa de vácuo. O produto bruto da reacção foi analisado por 1 H RMN e 13 C RMN, sendo confirmada a obtenção de 3-hidroxiandrost-5-eno-7,17-diona, 637,2 mg (70%), que após cristalização em metanol foi caracterizado, apresentando dados semelhantes aos descritos em I.. 232