SARSTEDT AMOSTRAGEM, CENTRIFUGAÇÃO TRANSPORTE FECHADO. O aumento de enfermidades infecciosas se faz indispensável proteção pessoal VERSÁTIL SEGURO

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1 AMOSTRAGEM, CENTRIFUGAÇÃO E TRANSPORTE SARSTEDT OBTENÇÃO DA AMOSTRA O aumento de enfermidades infecciosas se faz indispensável a proteção pessoal FECHADO VERSÁTIL SEGURO RISCOS: RISCOS: EFEITO AEROSSOL SEGURANÇA TRANSFERÊNCIA SEGURANÇA

2 BPLC -Boas Práticas em Laboratório rio Clínico É o conjunto de medidas preventivas e corretivas tomadas para minimizar ou eliminar os erros praticados nos laboratórios de análises clínicas, tornando os exames cada vez mais confiáveis. TIPOS DE AMOSTRA -Soro Referência bibliográfica: World Health Organization Use of anticoagulants in diagnostic laboratory investigations WHO/DIL/LAB/99.1 Substâncias que podem ser liberadas das células:soro lactado, k, desidrogenase, fosfato, amônia, etc... Vantagens do soro: 1. Soro é a amostra matriz mais usada para testes bioquímicos. 2. A maioria dos valores de referência tem sido estabelecido usando soro. Quando separado das células, o soro tem maior estabilidade. Desvantagens do soro: 1. A coagulação lisa células do sangue, produzindo hemólise. 2. O soro não existe no nosso organismo, ele é induzido em condições de laboratório. TIPOS DE AMOSTRA -plasma TIPOS DE AMOSTRA -plasma Vantagens PLASMA 1. Sangue não coagulado diminui a hemólise. 2. Tempo para a utilização da amostra é reduzido Desvantagens PLASMA - 1. Níveis de plasma depende da estabilidade do anticoagulante usado. 2. Interferências podem ocorrer devido a presença a de fibrina ou fragmentos dos quais Podem se formar com o tempo. 3. O sangue pode ser diluído do quando coletados com anticoagulantes líquidos, l se os tubos não forem preenchidos adequadamente. 4. Alguns anticoagulantes afetam adversamente as dosagens de certos analitos. Vantagens PLASMA 1. Sangue não coagulado diminui a hemólise. 2. Tempo para a utilização da amostra é reduzido Desvantagens PLASMA - 1. Níveis de plasma depende da estabilidade do anticoagulante usado. 2. Interferências podem ocorrer devido a presença a de fibrina ou fragmentos dos quais Podem se formar com o tempo. 3. O sangue pode ser diluído do quando coletados com anticoagulantes líquidos, l se os tubos não forem preenchidos adequadamente. 4. Alguns anticoagulantes afetam adversamente as dosagens de certos analitos.

3 TIPOS DE AMOSTRA -plasma Vantagens PLASMA 1. Sangue não coagulado diminui a hemólise. 2. Tempo para a utilização da amostra é reduzido Desvantagens PLASMA - 1. Níveis de plasma depende da estabilidade do anticoagulante usado. 2. Interferências podem ocorrer devido a presença a de fibrina ou fragmentos dos quais Podem se formar com o tempo. 3. O sangue pode ser diluído do quando coletados com anticoagulantes líquidos, l se os tubos não forem preenchidos adequadamente. 4. Alguns anticoagulantes afetam adversamente as dosagens de certos analitos Vantagens do plasma em relação ao soro Economia de tempo. 2. Alta produção 15 a 20% > no soro. Pode ocorrer no soro, a coagulação pós-centrifugap centrifugação. 4. Os resultados provenientes do plasma são mais representativos do estudo in vivo. 5. Pequeno risco de hemólise e de trombocitólise. Hb livre é 10 x menos concentrada no plasma, e plaquetas intactas, não existindo pseudo-hipercalemia. 1. Desvantagens em relação do ao plasma soro Eletroforese de proteínas - O fibrinogênio aparece no pico da região δ-globulinas podendo simular um pico monoclonal. 2.Interferência método-dependente Obs.: Soro ou plasma recentrifugados É notável o aumento na concentração de K, fosfato, lactato, desidrogenase e na atividade alaninaamino-transferase. A fase pré analítica leva mais tempo do que a fase analítica. Portanto, esse tempo é de importância crítica para o procedimento diagnóstico inteiro.

4 Técnicas Nome de identificação Pode o laboratório confundir a Identificação Um Meios pacote eletrônicos ou Número etiquetas Direta adesivas préimpressas na admissão minha ou Indireta amostra? Identidade particularidades do paciente da amostra vinculada ao recipiente (por que localização) acumula as Volu me Identificação de amostras no Laboratório Ade qua do COM ANTICOAGULANTES PODE SER CENTRIFUGADO IMEDIATAMENTE sangue SEM ANTICOAGULANTES ARMAZENADO DURANTE MINUTOS, SEM AGITAR E SE POSSÍVEL NO ESCURO PLASMA SORO 1/3 TAT TOTAL (Howanitz,1992) 45 min.após coleta amostras devem ser recebidas no laboratório para serem processadas. (Rosen,1992) Amostras protegidas de luz: Bilirrubinas, vitaminas porfirinas... Etc. O sangue completarem soroéobtido depois QUAIS que a SORO Quanto tempo? oprocesso partir as AS plaquetas da OU DIFERENÇAS centrifugação PLASMA coagulação. e fatores do Como? O centrifugação inibida imediatamente plasmaéo pela do depois sobrenadante sangue adição coleta. total.a de células anticoagulantes coagulação resultante da foi Volum e Adequ ado

5 SORO GEL 1-Fazer 2-Deixar 3-Esperar 4-Centrifugar homogeneização para atéque coagular o sangue na quando posição coagule termina vertical totalmente(30 temp.amb.) a coleta(tubo plast.) SE A NOS ERRO ISSO NÃO a FOR 2500g FEITO, x 10 min A PÓS Px20Graus S COAGULAÇÃO, Cent. PODE LEVAR O QUE ANALIZADORES NO VOLUME PIPETADO, E OCORRER BLOQUEIOS É A SUBSTÂNCIA GEL SEPARADOR? OBS: No momento da obtenção do soro,é necessário : PORQUE? REFAZERA PROVOCA FOSFATO ATIVIDADE NO INORGÂNICO, AUMENTO CENTRIFUGAÇÃO NA LACTATO CONCENTRAÇÃO DEPOIS,DIIDROGENASE DA DE ARMAZENAGEM COAGULETOTALMENTE NECESSÁRIO MOMENTO ALANINA ESPERAR DA OBTENÇÃO AMINOTRANSFERASE. ATÉQUE DO O SORO, SANGUE É POTÁSSIO, EM TEMPERATURA TOTALMENTE(30 AMBIENTE) MINUTOS E ERRO NOS VOLUMES PIPETADOS E BLOQUEIOS NOS ANALISADORES Vantagens Ótima qualidade do soro Alto rendimento do soro Facilidade para transf. do soro Barreira de difusão estável em 4ºC por mais de 72h Diferentes Tipos de Plasma Testes coagulação PLASMA PL.RICO PL.POBRE PLAQ.1000 FCR 150 = G 2000 TEMPO 10 5 minutos EM MIN. PL.LIVRE 2000 a a 30 minutos Volu me Adequ ado

6 MANIPULAÇÃO DE AMOSTRAS APÓS A CENTRIFUGAÇÃO ÃO SEPARAÇÃO IDEAL PARA TRANSPORTE (SERAPLÁS) VIA INTRÍNSECA (ADP) Plaquetas VIA EXTRÍNSECA (Tecido lesado) COAGULAÇÃO Ferida Vasoconstrição local adrenalina + noradrenalina Corrente sanguínea nea Agregação das plaquetas ao colágeno Ca++, Mg, Fibrinogênio, Fator Termoestável, Fator Willebrand (?) Agregação reversível e liberação FP3 Via intrínseca Tromboplastina sangue Trombina Via extrínseca Tromboplastina tecidual Agregação Irreversível das Plaquetas Trombina do Plasma Trombosteína Retração do Coágulo Tampão Hemostático Químicos ANTICOAGULANTES EDTA Citrato Fluoreto Enzimáticos Heparina Hirudina Quelação cátions bivalentes Inibe a glicólise Atua na trombina

7 S-MONOVETTE -APLICA APLICAÇÃO Observa Observação recomendações para cada de tipo uso de do anticoagulante fabricante e Preparação SORO Soro - gel Aplicação 10 minx2000gx20graus C 10 minx2500gx20graus C Lítio-Heparina 10 minx2000gx20 graus C EDTA gel 10minx2500gx 20graus C Citrato Coagulação Fluoreto 10 minx1800gx20graus C 10 minx2000gx20graus C EFEITOS DO TEMPO TRANSPORTE E TEMPERATURA DURANTE O O PROCEDIMENTO É REGIDO PELA ESTABILIDADE DOS CONSTITUINTES DA AMOSTRA. AS CAUSAS MAIS IMPORTANTES QUE ALTERAM A QUALIDADE DE UMA AMOSTRA SÃO: METABOLISMO DAS CÉLULAS EVAPORAÇÃO/SUBLIMAÇÃO REAÇÕES QUÍMICAS DECOMPOSIÇÃO MICROBIOLÓGICAS PROCESSOS OSMÓTICOS EFEITO DA LUZ PROPAGAÇÃO GASOSA O MELHORAM TRANSPORTE ACONFIABILIDADE A RÁPIDO R E O CURTO RESULTADO PERÍODO DE DE ARMAZENAGEM LABORATÓRIO RIO (CONDENSAÇÃO DIFERENTES ARMAZENADAS OS TEMPO O PERIGO QUANDO ESPÉCIES DA ARMAZENADA EM EVAPORAÇÃO UMIDADE RECIPIENTES DE AMOSTRAS EXISTENTE EM FECHADOS REFRIGERADOR TAMBEM SÃO ELEMENTOS PRESERVADAS EXISTE (CUIDADO DENTRO RESFRIADOS) POR COM MAIS AS EXCEÇÕES). REFRIGERADORES REGRAS E RECOMENDAÇÕES AMOSTRAGEM SORO/PLASMA COAGULAÇÃO AGENTES SEMPRE PROBLEMAS ARMAZENAR SEPARADORES ÉACELERADO. E DESCARTÁVEL PERMITEM ARMAZENAGEM AS QUE ( GEL FOR AMOSTRAS O SORO SEPARADOR USADO. FIQUE NA SERÃO ACIMA / POSIÇÃO SERAPLÁS) REDUZIDOS DO SANGUE S) VERTICAL, MELHORAM SE NO TUBO O UM A PROCESSO PRODUÇÃO ORIGINAL. SISTEMA DE

8 A minutos SEPARAÇÃO A AMOSTRA APÓS S NO A PERÍODO DE COLETA SANGUE PARA DEVERIA 1 hora. GARANTIR ESTAR A CENTRIFUGAÇÃO NO LABORATÓRIO RIO45 E A BILIRRUBINAS NUNCA ESTÁVEL SEPARAR. O A GLICÓLISE EFEITO LISE ANTES DA PARA LUZ, DE 30 MANTER PREVENINDO MINUTOS A GLICOSE E QUEDA MAIS DE, NOS LACTATO 2 HORAS. VALORES E O DE ph REGRAS E RECOMENDAÇÕES EVITAR AMOSTRAS DO AR.EVAPORAÇÃO/SUBLIMA ÁCIDO FÓLICO). F ÃO/SUBLIMAÇÃO., QUANTO COM VITAMINA VOLUMES C,PORFIRINAS,CREATINA POSSÍVEL ÃO. PEQUENOS, O CONTATO E SUPERFÍCIES QUINASE COM (CK) DE O E VOLÁTEIS. CONCENTRAÇÃO CONTATO GRANDE / ATIVIDADE PRODUZIRÁAPARENTE DE TODOS OS COMPONENTES AUMENTO NÃO NA Éuma em moléculas) diferentes acelera suspensão técnica de (células, que acordo separa organelas partículas massas ou densidades. com Ela ou centrífuga partículas a até sedimentação em suspensão submetendo àforça as CENTRIFUGAÇÃO da gravidade g. vezes a Existem -Centrifuga Centrifugação dois tipos de centrifugação ão: Centrifugação insolúvel como ser transferido um um tufo por pellet, e diferença centrifugada. diferencial:ocorre para e as outro menos a de tubo. massa As densas partículas Geralmente separação e densidade. permanecem mais éusado densas A material no célula c para líquido l são purificação homogeneizada celular coletadas sobrenadante, solúvel no de fundo proteínas. écolocada que material do pode tubo CENTRIFUGAÇÃO Pois não moléculas ou centrifugadas velocidade alcançando zonas o tempo que ando controlada, de curto podem o acordo objetivo solução gradiente ou ser de muito com acordo da semelhantes contendo técnica. tlongo com densidade:ocorre diferenças pode sacarose na moléculas não forma ser entre num e suficiente na de tubo massas. separação densidade, seu e interesse. ou são danificar As centrifugados formando de partículas o o material, bandas com são ou A obter de coagulou. centrifugação verificar sorodeve que ser do sangue realizada realmente para depois se O do que tempo sangue estão éde sob espera 30 o para minutos, a coagulação pacientes CENTRIFUGAÇÃO anticoagulante, deficiência,com retardo ou efeito na com coagulação. de alguma terapia SARSTEDT

9 CENTRIFUGAÇÃO TIPOS DE ROTOR Fase da centrifugação * Refrigeração/ Atividade (Rossing, Crescimento enzimática 1980) bacteriano Congelamento FCR (g) = 1,118 x (10) 5 x r x (rpm) 2 Fase pós p s centrifugação ÂNGULO FIXO MEDIDA DO RAIO CENTRIFUGAÇÃO DE MICROTUBOS CALCULO DA CENTRIFUGAÇÃO ÃO CENTRIFUGAÇÃO CENTRIFUGAÇÃO A centrifugação do tubo microcoletor é realizada a uma velocidade de 6000 a g por no mínimo 90 seg.

10 A liberação baixa,mas Fatores Hemólise de não não HB em temperatura ésempre (ex: sangue acompanhada de armazenado congelamento). pela originados interferentes da lise de plaquetas podem e granulócitos. também serem em Pós -COLETA Quando as bolhas de ar foram removidas e a amostra for fechada, ela deve ser misturada vagarosamente para misturar o sangue com a heparina. Se isto não for feito, pode haver a formação de coágulos que por sua vez pode resultar em erros e danificar o analisador depositando nos eletrodos. OBS: Nunca homogeneizar a amostra sem retirar o ar. A escolha do anticoagulante para gasometria Recomendada a heparina de LítioL A heparina Sódica S pode : - aumentar o sódio. s - diminuir o ph, bicarbonato e o excesso de base. - O cálcio c ionizado diminui se os locais de ligação da heparina não estiverem saturados. Coleta de amostra - condições anaeróbicas - ( troca de gases, com o ar ambiente). Armazenagem e transporte Amostras afetadas : Metabolismo das célulasc - Glicólise lise Formação ácido láctico l e mudança a ph, bicarbonato e excesso de bases voltados para os limites da acidose metabólica. Consumo de oxigênio para leucócitos citos e plaquetas: Diminui o PO2 e aumenta o PCO2. O processo pode ser reduzido pelo resfriamento da amostra. Liberação íons das células. c Armazenagem prolongada, vibração durante o transporte e severa trombocitose são fatores que podem contribuir para o aumento do potássio e diminuição do cálcio c ionizado no plasma. AS OPORTUNIDADES, Normalmente se apresentam disfarçadas de trabalhos árduos e é por isso que muitos não as reconhecem. Reconheça, e aproveite-as (Ann Landers)

11 OBRIGADA!!!!!! MÁRCIA