Avaliação de hemocomponentes: garantia do produto. Flavia Naves Givisiez Gerência Controle Qualidade
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- João Lucas Ribas Cavalheiro
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1 Avaliação de hemocomponentes: garantia do produto Flavia Naves Givisiez Gerência Controle Qualidade
2 Produto hemoterápico Garantia do produto Doadores Pacientes
3 Como a avaliação de hemocomponentes pode garantir a qualidade do produto? Preparo e controle de qualidade (CQ) de hemocomponentes Sumário: 1) Delimitação dos processos 2) Validação 3) Padronização 4) Monitoramento sistemático Premissas básicas controle de qualidade em hemocomponentes Objetivos Amostragem Legislação brasileira Comparações requisitos: Brasil, AABB, Council of Europe Exemplos - Situações reais
4 Qual é o lote no preparo de hemocomponentes? Como definir o processo?
5 Qual é o lote no preparo de hemocomponentes? Como definir o processo?
6 Qual é o lote no preparo de hemocomponentes?
7 Qual é o lote no preparo de hemocomponentes? BLAST FREEZER FREEZER -80 C modelo Vertical
8 Validações preparo hemocomponentes Quando são realizadas: Processo novo (validação prospectiva ou concorrente) Desvios nos hemocomponentes que exijam ajustes (durante monitoramento) Manutenções corretivas em pontos críticos do equipamento
9 Validação da metodologia BC-pool Resultados CQ em 126 pools de concentrados plaquetas Parametro Média ± DP Plaquetas (x ) por unid ± 5.40 ph 7.18 ± 0.11 Volume (ml) ± Resultados de validação 126 pools plaquetas provenientes de buffy-coat - HEMOMINAS / HBH Ano 2009
10 Laudo de validação Mudanças no processo: Preparo de CH, Pool de CP desleucocitado (pool de BC) e plasma Novo modelo de extrator Tabela 05- Média, desvio padrão e percentual de conformidade dos parâmetros de volume, plaquetas, leucócitos, ph do Pool de concentrado de plaquetas desleucocitado (05 doadores) Bolsa Volume (ml) Plaqueta/ unidade (x10 10 ) Leucocitos /unidade (x10 6 ) ph Média Desvio Padrão 263,2 30,12 0,03 7,18 15,5 4,44 0,05 0,17 % de conformidade 86,2% 79,3% 100,0% 100,0% n
11 Laudo de validação Após manutenção corretiva centrifuga refrigerada Preparo de CH, CP e plasma pela metodologia PRP Tabela 01- Média, desvio padrão, máximo, mínimo e percentual de conformidade dos parâmetros de volume, plaquetas, leucócitos, ph do Concentrado de plaquetas (CPQ) Bolsa Volume (ml) Plaquetas/ unidade (x10 10 ) ph Leucócitos/ unidade (X10 8 ) Média 65,1 8,1 7,1 0,9 Mediana 65,0 8,0 7,2 0,7 Desvio Padrão 3,1 2,1 0,3 0,8 Máximo 83,0 15,9 7,6 4,0 Mínimo 49,7 3,8 5,5 0,03 % de conformid. 98,4% 90,4% 95,7% 89,3% n
12 Padronização dos procedimentos validados Capacitação da equipe e Padronização dos procedimentos (POP, formulários, registros, etc) Objetivos: Manter os resultados obtidos na validação do processo Garantir a boa performance durante o período de operação Minimizar desvios
13 ANEXO 2 do POP xxxx TABELAS DE PROGRAMAS DE CENTRÍFUGAS E EXTRATORES AUTOMÁTICOS
14 Taxa de conformidade do parâmetro "hematócrito" em concentrados de hemácias - Taxa de conformidade do parâmetro hematócrito no CH - UFHs Hemocentro de Uberlândia - Fund HEMOMINAS Mai/10 a Mar/12 100,0% 80,0% 60,0% 40,0% 20,0% 0,0% Inicio de extração automatizada em 100% das bolsas (abr/11) ar UDI Global Meta
15 Monitoramento dos procedimentos Testes de controle de qualidade de hemocomponentes Análise sistemática dos resultados laboratoriais Investigações e ações corretivas para resultados inadequados
16 Laboratório de Controle de Qualidade de Hemocomponentes Pessoal qualificado e em número suficiente Métodos analíticos validados Controles internos Controles externos (avaliação inter-laboratorial) Equipamentos com programa de calibração, manutenção preventiva e qualificação Os resultados do controle de qualidade devem ser seguros e inquestionáveis
17
18 Vox Sanguinis (2010) 98,
19 Clinica Chimica Acta 413 (2012)
20 Monitoramento dos procedimentos Objetivos Contribuir com a manutenção do funcionamento adequado, antecipando desvios antes da não conformidade Verificar conformidade dos hemocomponentes = demonstrar a conformidade dos produtos do processo
21 Objetivos Contribuir com a manutenção dos processos Antecipar desvios antes da não conformidade Processo validado e padronizado Estabelecimento das especificações Limites das normas Monitoramento (evolução no decorrer do tempo) Alertas, caso haja necessidade de medidas corretivas Fonte: Begue, Stéphane Simpósio Franco-Brasileiro 2012
22 Objetivo : Matriz de processo Antecipar sinais de não conformidade Normas Sinal de alerta Especificação Fonte: Begue, Stéphane Simpósio Franco-Brasileiro 2012
23 Verificar conformidade dos hemocomponentes = Demonstrar conformidade dos produtos do processo Baseado em controle estatístico Controle em 100% dos produtos é impossivel Estabelecida em um processo com hemocomponentes homogêneos Processo padronizado Objetivos Plano de amostragem Amostragem representativa da produção Amostragem controle é representativa da produção Fonte: Begue, Stéphane Simpósio Franco-Brasileiro 2012
24 Controle de qualidade em hemocomponentes Amostragem: É a pedra angular do controle de qualidade É de responsabilidade do CQ Quantidade representativa Quantidade viável ( controle não usado é controle desnecessário ) Não é viável realizar testes de controle de qualidade em amostragem excessiva Plano de amostragem deve ser representativo do processo
25 Amostragem para testes laboratoriais CQ Processo Amostragem para CQ: PROCESSO a ser analisado Por ex, CH em CPDA1 pelo PRP Quantas bolsas e quais hemocomponentes são representativos do processo?
26 Legislação brasileira Portaria MS 2712/2013 Seção V - Do Controle de Qualidade dos Componentes sanguíneos Art Os serviços de hemoterapia realizarão o controle de qualidade sistemático de todos os tipos de componentes sanguíneos que produzirem. 3º O serviço de hemoterapia deve ter protocolos escritos, definindo: I - o tipo de controle a ser feito em cada componente sanguíneo; II - a amostragem; e III - os parâmetros mínimos esperados para cada item controlado.
27 Legislação brasileira Portaria MS 2712/2013 Seção V - Do Controle de Qualidade dos Componentes sanguíneos Art º O controle de qualidade dos concentrados de hemácias e dos concentrados de plaquetas deve ser realizado em, pelo menos, 1% da produção ou 10 (dez) unidades por mês (o que for maior). 2º O controle de qualidade dos plasmas e dos crioprecipitados deve ser feito em amostragem definida no Anexo VI.
28 Legislação brasileira Portaria MS 2712/2013 Seção V - Do Controle de Qualidade dos Componentes sanguíneos Art º Cada item verificado pelo controle de qualidade deve apresentar um percentual de conformidade igual ou superior a 75%. 5º Com relação à produção de concentrado de plaquetas por aférese e contagem de leucócitos em componentes celulares desleucocitados a conformidade considerada deve ser igual ou superior a 90%.
29 n0 de Pq/unid (x10e10) Percentual de conformidade = 80% = 8 resultados conforme em 10 bolsas analisadas 12 Número de plaquetas por unidade de Concentrado de plaquetas Unidades analisadas PQ/UNID (X10e10) Valor de ref. (5.5 x 10e10 plaq/unid)
30 Legislação brasileira Portaria MS 2712/2013 Seção V - Do Controle de Qualidade dos Componentes sanguíneos Art º A avaliação da contaminação microbiológica dos componentes sanguíneos celulares será realizada utilizandose amostragem igual ou superior a 1% da produção ou 10 (dez) unidades por mês (o que for maior). 7º Na hipótese do 6º, todos os casos positivos devem ser devidamente investigados na busca de uma causa corrigível. 8º Pelo alto risco de contaminação microbiológica dos concentrados de plaquetas pela sua condição de armazenamento, recomenda-se realização de avaliação de contaminação microbiológica em 100% desta produção.
31 Legislação brasileira Portaria MS 2712/2013 Seção V - Do Controle de Qualidade dos Componentes sanguíneos Art º Serão observados os parâmetros mínimos a serem verificados em cada componente sanguíneo, nos termos do Anexo VI. Art Os serviços de hemoterapia realizarão avaliações periódicas dos resultados do controle de qualidade, de forma que tais resultados sejam revisados e analisados, e ações corretivas sejam propostas para as não conformidades observadas.
32 Legislação brasileira Portaria MS 2712/2013 ANEXO VI Concentrado de hemácias Análises Teor de hemoglobina Valores esperados Hematócrito 50 a 80% * Grau de hemólise Microbiológica maior que 45g/unidade menor que 0,8% da massa eritrocitária (no último dia de armazenamento) Negativa * O hematócrito esperado depende do tipo de solução preservativa utilizada na bolsa, sendo de 50 a 70% para os concentrados de hemácias com soluções aditivas e de 65 a 80% para com CPDA-1. OBS.: deve ser realizado controle de qualidade em, pelo menos, 1% da produção ou 10 unidades por mês (o que for maior).
33 Legislação brasileira Portaria MS 2712/ ANEXO VI Concentrado de hemácias com camada leucoplaquetária removida Análises Teor de hemoglobina Valores esperados Hematócrito 50 a 80% * Leucócitos Grau de hemólise Microbiológica maior que 43g/unidade menor que 1,2 x 10e9/unidade menor que 0,8% da massa eritrocitária (no último dia de armazenamento) Negativa * O hematócrito esperado depende do tipo de solução preservativa utilizada na bolsa, sendo de 50 a 70% para os concentrados de hemácias com soluções aditivas e de 65 a 80% para com CPDA-1. OBS.: deve ser realizado controle de qualidade em, pelo menos, 1% da produção ou 10 unidades por mês (o que for maior).
34 Vox Sanguinis (2014) 107, 1-9
35 Legislação brasileira Portaria MS 2712/ ANEXO VI Plasma fresco congelado (PFC) e Plasma fresco congelado 24 h* Análises Valores esperados Volume maior que= 150mL TTPA ; # Até valor do pool controle + 20% Fator VIII:C ; #; & maior que= a 0,7UI/mL Fator V ; #; & maior que= a 0,7UI/mL Leucócitos residuais menor que 0,1 x 10e6/mL Hemácias residuais menor que 6,0 x 10e6/mL Plaquetas residuais menor que 50 x 10e6/mL * O parâmetro de volume deve ser avaliado em todas as unidades produzidas, os demais em 1% da produção ou 4 unidades (o que for maior) mensalmente; O serviço de hemoterapia pode optar por apenas um destes parâmetros utilizando unidades com até 30 dias de armazenamento. O serviço de hemoterapia deve realizar dosagem de F VIII quando fornecer plasma excedente para fracionamento; # A análise deve ser feita utilizando amostras de PFC e PFC24 conjuntamente e em proporção definida pelo serviço baseado na produção; & As dosagens de F VIII:C e F V podem ser realizados em pools de até 10 amostras de bolsas de plasma, com um mínimo de 4 pools mensais;
36 Comparando concentrado de hemácias: legislação brasileira, AABB, Conselho Europeu Órgão Regulamentador Parâmetros e amostragem BRASIL - PORTARIA 2712/2013 AABB CONSELHO EUROPEU Hemoglobina > 45g/unid ; Hematocrito 50 a 80% * Teste hemólise <0,8% ; Microbiologico: Negativo 1% da produção ou 10 unidades por mês (o que for maior) RBCs without additive solutions shall be prepared using a method known to result in a final hematocrit of 80% Minimum 4 units per month: minimum hemoglobin 45g/unit ; hematocrit 65%-75%, hemolysis <0.8% Test 1% of all units for volume: 280 ± 50 ml
37 Comparando conc. de hemácias buffy-coat removido em solução aditiva Legislação brasileira, AABB, Conselho Europeu Órgão Regulamentador BRASIL - PORTARIA 2712/2013 AABB CONSELHO EUROPEU Parâmetros e amostragem Hemoglobina > 43g/unid ; Hematocrito 50 a 70% Teste hemólise <0,8% ; leucócitos < /unid Microbiologico: Negativo 1% da produção ou 10 unidades por mês (o que for maior) None Minimum 4 units per month: minimum hemoglobin 43g/unit ; hematocrit 50%-70%, hemolysis <0.8%; leukocyte content < /unit. Test 1% of all units for volume: Volume range differs by additive
38 Comparando concentrado de hemácias desleucocitado Legislação brasileira, AABB, Conselho Europeu Órgão Regulamentador BRASIL - PORTARIA 2712/2013 AABB FDA CONSELHO EUROPEU Parâmetros e amostragem Hemoglobina > 40g/unid ; Teste hemólise <0,8% ; leucócitos <5, /unid (90% de conformidade) Microbiologico: Negativo 1% da produção ou 10 unidades por mês (o que for maior) leukocyte number to < for RBCs in at least 95% of the units retain 85% of red cells after filtration. Test 1% of all units from WB (with a minimum of 4 units/month) for each method of leukocyte reduction for residual leukocytes < /unit. Test 1% of all units (with a minimum of 10 units/month) for residual leukocyte count < /unit (90% of the units); 1% of all units with a minimum of 4 units/month for hemoglobin (40 g/unit) and hematocrit (50%-70%); 1% of all units for volume; a minimum 4 units/month for hemolysis<0.8%
39 Comparando concentrado de plaquetas Legislação brasileira, AABB, Conselho Europeu Órgão Regulamentador BRASIL - PORTARIA 2712/2013 AABB FDA CONSELHO EUROPEU Parâmetros e amostragem Plaquetas > 5,5 x /unid (75% de conformidade) ph > 6.4 Microbiologico: Negativo 1% da produção ou 10 unidades por mês (o que for maior) at least 90% of units sampled contain platelets and have a ph 6.2 at the end of allowable storage Test 4 units each month at the end of storage interval for ph ( 6.0). Also, centrifugation conditions must ensure platelet count of /unit in 75% of the units. Test volume for all units (>40 ml per platelets). Test 1% of units for platelet count (> / single unit equivalent in at least 75% of the units tested). Test 1% of all units for residual leukocytes before leukocyte reduction Test 1% of all units or minimum of 4 units per month for ph (6.4 to 7.4 in 90% of the units tested)
40 Análise estatística Resultados do CQ hemocomponentes Média, mediana e desvio-padrão Percentual dentro do valor de referência: mínimo 75% das bolsas mínimo 90% para desleucocitados e plaquetaférese Acompanhamento contínuo Gerenciamento de não conformidades Melhoria constante dos processos
41 EXEMPLOS SITUAÇÕES REAIS
42 Fibrina em concentrado de plaquetas Contaminação bacteriana
43 CONTAGEM DE PLAQUETAS EM CONCENTRADOS DE PLAQUETAS
44 n0 de Pq/unid (x10e10) Percentual de amostras dentro do valor de referência (contagem de plaquetas em concentrados plaquetários) = 20% Mês estatístico Janeiro/ Número de plaquetas por unidade de Concentrado de plaquetas 1 2 Unidades 3analisadas 4 5 PQ/UNID (X10e10) Valor de ref. (5.5 x 10e10 plaq/unid)
45 Contagem de plaquetas 5,5 x plaq/bolsa Investigação de possíveis causas Coleta ST: homogeneização inadequada do ST durante a coleta; ordenha inadequada do tubo coletor, volume de ST superior a 495 ml; volume de ST inferior a 404 ml; tempo de coleta superior a 12 minutos Tempo ou velocidade excessivos na primeira centrifugação (PRP) Equipamentos com falhas (por ex, centrifugação incompleta, extração insuficiente de PRP) Desobediência à padronização dos procedimentos Falhas nos testes de controle de qualidade dos CPQs
46 Técnica Plasma Rico em Plaquetas Possíveis erros: 1ª centrifugação mais pesada: CPQ =?? CPDA1 Centrifugação leve Ex.: 2000 g, 3 min Coleta de 450 ml sangue total em 63 ml de CPDA1 Possíveis erros: 2ª centrifugação mais leve: CPQ =?? PFC =?? Possíveis erros: Extração insuficiente: CPQ =??? HT =??? PFC =??? PRP Extração do PRP CH-CPDA1 CP-PRP Centrifugação pesada do PRP Ex.: 5000 g, 7 min
47 n0 de Pq/unid (x10e10) Percentual de amostras dentro do valor de ref. Após mudanças nos procedimentos Mês estatístico Fevereiro/2004 Número de plaquetas por unidade de Concentrado de plaquetas Unidades analisadas PQ/UNID (X10e10) Valor de ref. (5.5 x 10e10 plaq/unid)
48 TEMPO DE COLETA DE SANGUE TOTAL
49 100% Percentual de coletas sangue total com tempo menor ou igual a 7 minutos Fundação HEMOMINAS - Periodo de jan/10 a dez/11 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%
50 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% Percentual de coletas sangue total com tempo de coleta menor ou igual a 7 minutos - Fundação HEMOMINAS - Período de jan/10 a dez/11
51 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% Percentual de coletas sangue total com tempo de coleta menor ou igual a 7 minutos Fundação HEMOMINAS - Periodo de jan/10 a dez/11
52 mai/10 jun/10 jul/10 ago/10 set/10 out/10 nov/10 dez/10 jan/11 fev/11 mar/11 abr/11 mai/11 jun/11 jul/11 ago/11 set/11 out/11 nov/11 dez/11 jan/12 fev/12 mar/12 100% Taxa de conformidade do parâmetro contagem de plaquetas no CP Global FH Mai/10 a Mar/12 75% 50% 25% 0%
53 Aumento do comprimento do tubo coletor (20 cm) = aumento do tempo de coleta e ativação coagulação
54 HEMÓLISE EM CONCENTRADOS DE HEMÁCIAS
55 Detecção de aumento de grau de hemólise em CH com remoção BC e em solução aditiva (provenientes da metodologia BC) Percentual de conformidade em Testes de Hemólise - GOV 2010 Nov/2010: primeiras bolsas CH com hemólise visual
56 Investigação de prováveis causas hemólise Tempo de extração excessivo = Um funcionário Gkoumassi E - Hemolysis of red blood cells during processing and storage Transf 2011
57 Finalizando... Decisões sobre a conformidade: CQ deve participar de tomadas de decisões independentemente das atividades de produção Deve fornecer interpretação imparcial dos resultados Comentário: CQ não é responsável pela seleção ou implementação de medidas corretivas, evitando assim uma situação de auto-avaliação.
58 Agradecimentos Equipe Gerência de Controle de Qualidade Fundação HEMOMINAS Controle de Qualidade de todas UFH Fracionamento e Produção de todas UFH Doadores de sangue Receptores Flávia Naves Givisiez - Gerência de Controle de Qualidade Fund HEMOMINAS cq@hemominas.mg.gov.br flavia.givisiez@hemominas.mg.gov.br (31) ou (31)
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