Detecção de reacções químicas baseada num QCM (quartz crystal microbalance).
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- Bento Casado Pinto
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1 Detecção de reacções químicas baseada num QCM (quartz crystal microbalance). João Encarnação, doutoramento O simbiose dos centros de investigação CEOT e CBME. J. Encarnação G. Ferreira P. Stallinga H.L. Gomes
2 O Quartz Crystal Microbalance SiO 2 Active area Au Electrical driving circuit O QCM é um detector de massa. A frequência de ressonância de oscilação é uma função da massa depositada em cima do cristal. Sauerbrey: f = K m K = 2f 02 / A(ρµ) 1/2 Por isso, é muito usado em medições de espessura de films, etc. Muito sensível (exemplo standard 5 MHz cristal, 1 Hz ruido): 17.6 ng ou kg/m 2 ou 0.35 Å ou 0.1 ML
3 Limitações A limitação da equação de Sauerbrey é que é apenas válida para massa rígida. Além disso, as medições tornam-se difícil em meios líquidos. Kanazawa (1980s) Liquid immersion QCM: f = K (ρµ) 1/2 K = f 0 2/3 / (πρµ) 1/2 viscosity of liquid density of liquid Distance to interface Detecta mudanças perto da interface Debeye length (0.25 µm) Wave amplitude
4 O princípio de detecção Meio líquido X-tal Reagente I Reagente II tempo frequency tempo Injecção do reagente II
5 Exemplo: formação de uma camada SAM k a Au+RSH Au-SR + ½H k 2 d QCM frequency response (SAM) R S H R S H R S H QCM R S H Frequency (Hz) Injection (Alkanethiol or blank) Time (Sec) Alkanethiol Blank 11-Hidroxy-1-undecanothiol SAM
6 Aplicações I: Deteminação das constantes da reacção (k) Log(f-f ) 300 K T = 320 K τ frequency tempo tempo E A f = f A exp( t/τ) + f τ = τ 0 exp(e A /kt) Log(τ) E A 1/kT
7 O princípio de detecção Meio líquido X-tal Reagente I Reagente A tempo Reagente B frequency Com B Sem B tempo
8 Aplicações II: Detector HIV Funcionalização Detecção Anticorpos ou antigénio Virus HIV
9 Electrónica Modelo electrónico do cristal Capacitância dos electrodes paralelos e cabos Modelo das oscilações mecánicas Acoplamento: Piëzo-eléctrico C 0 tem nada a ver com os processos de interesse (oscilações mecánicas) e tem de ser compensado.
10 Implementação CBME / OptoEl cristal β Frequency meter -A oscilador Barkhausen critério: ressonância quando a fase Aβ = 180 o (parte imaginária 0) 1 C 0 tem de ser compensado! Neste caso: Z( ω) = iωc 0 + R m 1 + i( ωl m 1 ωc m ω r = 1 / (L m C m ) 1/2 Z r = R m Usar apenas um oscilador e um frequencímetro perda informação )
11 Implementação CBME / OptoEl Spectro do cristal obtido pelo network analyzer: Impedance (Ω) R m resonance Frequency (Hz) O uso do network analyzer pode dar informação suplementar
12 Implementação CBME / OptoEl L m = L 1 + L 2 + L 3 C m = C 1 C 0 = C x + C y R m = R 1 + R 2 + R 3 Newtonian fluids: Rigid films R 3 = 0 ωl 2 = R 2
13 Implementação OptoEl 0: Desenho de um oscilador 1: Obtenção de transients f(t) (PASCAL) 2: Obtenção de spectras com network analyzer (automatizada, PASCAL) 3: Extracção dos parâmetros das spectras (automatizada, MatLab) 4: Determinação dos erros dos parâmetros (MatLab, Origin)
14 Implementação OptoEl 0: Desenho de um oscilador 1: Obtenção de transients f(t) (PASCAL) 2: Obtenção de spectras com network analyzer (automatizada, PASCAL) 3: Extracção dos parâmetros das spectras (automatizada, MatLab) Fitting 3 parâmetros R m, C 0 e L m (manter C m constante) Y ω) = iωc ( 0 + R m 1 + i( ωl m 1 ωc m ) Exp. results 4: Determinação dos erros dos parâmetros (MatLab, Origin) usando a teoria de percolação dos erros Erro do parâmetro p σ 2 p N 2 σ i i= 1 yi = p 2 Pequena variação de um ponto de mediação
15 Test run. Fitting e erros t R1 dr1 L1 dl1 C0 dc0 C1 Chi E E E E E E E E E E E E Test run of automated spectra processing.
16 Problemas
17 Problemas O amplitude dos transientes é muito pequeno (dahz) Torna-se pior quando a massa não é rígida e a distância da superfície é maior. No pior caso é apenas alguns Hz (detecção DNA). A resolução (intervalo de medição 1 s) é 1 Hz Outros químicos também reagem com a superfície
18 Problemas A temperatura tem de ser estabilizada df/dt = 8 Hz/ o C. A quantidade dos reagentes é mínima. Ciclo fechado. A bomba de circulação e qualquer injecçaõ introduzem transientes e ruido c Frequency (Hz) b d a Time (s) Fig. t- QCM in contact with water at 25ºC in batch (a), afterwards 50uL of water were injected on top of the crystal (b), a peristaltic pump was turned on (c), and the water started flowing at 0.5mL/min (d).
19 Problemas As lâmpadas fundidas no laboratório introduzem muito ruido.
20 Problemas Os líquidos têm de ser desgaseificados. MiliQ water Frequency (Hz) a b Time (m) Fig. s- The quartz crystal frequency response to contact with (a) degassed and (b) non degassed water. As bolinhas de ar em cima do superfície produzem transientes semelhantes ao sinal.
21 Positivo Cristais podem ser limpos com uma aplicação de tensão 1.4 V durante 120 s. A alternativa convencional (solução Piranha) estraga a camada de ouro depois de alguns ciclos Electrochemical procedure "Piranha" solution procedure Noise level (Hz) Initial reading 1st cycle 2nd cycle 3rd cycle 4th cycle 5th cycle 6th cycle 7th cycle Fig. l- QCM s resonant frequency readings noise level obtained after each regeneration cycle procedure.
22 Implementação CBME / OptoEl Shockwave / interference liquid surface medium quartz Shear wave Impuriy
23 Implementação CBME / OptoEl Shockwave / interference liquid surface medium quartz Shear wave Impuriy
24 Implementação CBME / OptoEl Shockwave / interference liquid surface Interference / standing waves medium quartz Shear wave Impuriy
25 Shockwaves Velocity of sound in ethanol: 1207 m/s Frequency: 5 MHz λ= 0.24 mm #ocillations: 26 Liquid height: 6.2 mm = 26*0.24 Ethanol dried-up
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